序號

物資名稱

工作內容、檢測項及質量標準

數量/單位

金額（元）

1

IIT的質粒和慢病毒生產及檢測

1.      大腸桿菌菌種RCB構建

在轉基因質粒功能確認完成的基礎上建立轉基因質粒大腸桿菌菌種的研究細菌庫（RCB），并在實驗室條件下進行灌裝；

具體工作：

將完成功能驗證的轉基因質粒轉入大腸桿菌，構建成為研究細菌庫，并分別完成RCB快速檢測。

研究細菌庫灌裝規格為1ml/支，灌裝數量20-40支；

產品儲存于-60℃以下

檢測項（快速檢測）：

?      活菌數檢測

?      染色鏡檢

?      質粒同質性

?      生理生化

?      劃種LB瓊脂平板

?      抗生素抗性檢查

?      質粒檢查

交付成果：

?      RCB制備報告

?      RCB產品

2.    質粒生產

在清潔實驗室環境下進行除菌過濾和產品灌裝，生產出發菌種為已放行RCB菌種,采用Max-prep plasmid Kit抽提質粒，并使用柱純化；

按照指定規格進行灌裝，批產量不少于20 mg

產品儲存于-60℃以下

檢測項：

?      含量

?      純度

?      質粒同質性

?      快速無菌

?      目的基因序列檢查

?      細菌內毒素

?      限制性酶切圖譜

交付成果：

?      質粒制備試驗報告

?      質粒產品

3.    質粒和細胞庫確認

提供來源清晰的 LVV包裝質粒，細胞庫；

具體工作：

?      Sanger 測序

?      細胞計數

?      細胞活率

?      無菌檢測

?      支原體

?      內毒素

交付成果：

?      質粒檢測記錄

?      細胞庫檢測記錄

4.    分析方法轉移及確認

分析方法的轉移及確認，用于檢測的樣品來自于工藝確認批。

分析方法轉移：

?      病毒滴度

分析方法確認：

?      細胞活力及計數

?      質粒DNA殘留

?      宿主細胞DNA殘留

?      宿主細胞蛋白殘留

?      牛血清白蛋白殘留

?      核酸酶殘留

?      快速無菌

?      內毒素

?      支原體

交付成果：

?      分析方法轉移報告

?      分析方法確認報告

5.    小試批

確認質粒和細胞后，驗證病毒上游工藝。

具體工作

?      同時執行3組慢病毒上游包裝工藝測試，確認質粒配比/用量參數，確認LVV包裝效率可滿足下游純化要求。

?      R&D物料檢測

?      質粒采用 LVV包裝質粒

?      包裝用293T細胞使用293T工作細胞庫（WCB）

?      執行以下檢測項完成小試批評估

檢測項目：

?      細胞活力

?      細胞計數

?      慢病毒感染滴度滴定

?      宿主細胞蛋白濃度檢測

?      P24慢病毒物理滴度

交付成果：

?      小試批實驗方案和報告

6.    工藝確認批

進行工藝確認批，完成慢病毒包裝工藝的適用性確認，在潔凈實驗室生物安全柜中進行罐裝，灌裝規格0.22ml/支或根據需求灌裝。

具體工作：

?      在工藝開發實驗室中，執行一批次最小規模（約8L）

?      使用確認的細胞工作庫和 LVV包裝質粒

?      原輔料R&D檢測

?      執行以下檢測項完成工藝確認批評估

檢測項目：

?      pH

?      性狀

?      細胞活力及計數

?      P24慢病毒物理滴度

?      慢病毒滴度滴定

?      質粒DNA殘留

?      宿主細胞DNA殘留

?      宿主細胞蛋白殘留

?      牛血清白蛋白殘留

?      核酸酶殘留

?      內毒素

?      快速無菌

?      支原體

交付成果：

?      工藝確認批方案及報告

?      工藝確認批慢病毒產品

7.  供應商資質

   應具備二級生物安全實驗室、GMP實驗室和管理體系

1

不超過45萬元

（含稅）